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正確處理樣本是保證牛ELISA試劑盒檢測資料的主要因素

釋出時間↟╃✘│: 2022-05-27  點選次數↟╃✘│: 117次
  通常我們可用於牛ELISA試劑盒檢測的樣本是有多種型別的╃•╃◕,如血清◕╃•、血漿◕╃•、尿液◕╃•、細胞培養上清或組織勻漿液等╃•╃◕,不同型別的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的☁◕◕▩。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性╃•╃◕,下面簡單介紹一下☁◕◕▩。
 
  1◕╃•、細胞培養上清↟╃✘│:
  取細胞培養上清到離心管╃•╃◕,1000×g離心20min╃•╃◕,除去細胞碎片及雜質╃•╃◕,取上清╃•╃◕,-20℃或-80℃儲存╃•╃◕,避免反覆凍融☁◕◕▩。
 
  2◕╃•、細胞裂解液↟╃✘│:
  吸去培養板內的培養基╃•╃◕,用胰酶消化細胞╃•╃◕,加適量培養基將細胞從培養板上吹下來☁◕◕▩。懸浮細胞可省略;
  收集細胞懸液╃•╃◕,1000×g離心10min╃•╃◕,棄去培養基╃•╃◕,用預冷的PBS潤洗3次;
  加入適量的預冷PBS或細胞裂解液重懸細胞☁◕◕▩。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸;
  將樣品放入-20℃或-80℃╃•╃◕,使樣品冷凍╃•╃◕,再放室溫解凍樣品╃•╃◕,反覆凍融幾次╃•╃◕,使細胞充分裂解☁◕◕▩。也可將樣品進行超聲破碎╃•╃◕,以達到裂解的目的☁◕◕▩。
 
  3◕╃•、血清↟╃✘│:
  血清是常用於牛ELISA試劑盒檢測的一類樣本╃•╃◕,處理也比較簡單;
  用無熱原◕╃•、無內毒素的試管或離心管採集血液標本╃•╃◕,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜╃•╃◕,使血清析出☁◕◕▩。4℃ 1000×g離心20分鐘╃•╃◕,仔細收集上清☁◕◕▩。建議將血清分裝多份╃•╃◕,-20℃或-80℃儲存╃•╃◕,避免反覆凍融;
  採血過程中應避免溶血╃•╃◕,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質╃•╃◕,在以HRP為標記的牛ELISA試劑盒檢測中會有非特異性的顯色╃•╃◕,而導致檢測的不準確性☁◕◕▩。同時也應避免細菌汙染╃•╃◕,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性☁◕◕▩。
 
  4◕╃•、血漿↟╃✘│:
  用含抗凝劑的採血管或離心管採集血液標本╃•╃◕,標本採集後30min內4℃╃•╃◕,1000×g離心15min╃•╃◕,取上清即血漿☁◕◕▩。將上清分裝多份╃•╃◕,-20℃或-80℃儲存╃•╃◕,避免反覆凍融☁◕◕▩。避免使用溶血或高血脂的標本;
  常用的抗凝劑為EDTA◕╃•、肝素鈉和枸櫞酸鈉等╃•╃◕,檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書╃•╃◕,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求;
  在牛ELISA試劑盒中除了包被外╃•╃◕,一般需進行45加樣☁◕◕▩。在定性測定中有時不強調加樣量的準確性╃•╃◕,例如規定為加樣一滴☁◕◕▩。此時應該使用相同口徑的滴管╃•╃◕,保持準確的加樣姿勢╃•╃◕,使每滴液體的體積基本相同☁◕◕▩。在定量測定中則加樣量應力求準確☁◕◕▩。標本和結合物的稀釋液應按規定配製☁◕◕▩。加樣時應將液體加在孔底╃•╃◕,避免加在孔壁上部╃•╃◕,並注意不可出現氣泡☁◕◕▩。
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