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解析豬ELISA試劑盒的樣本處理及要求

釋出時間◕·✘: 2022-04-26  點選次數◕·✘: 121次
  豬ELISA試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)·↟。往預先包被鵝免疫球蛋白M(IgM)捕獲抗體的包被微孔中✘↟↟✘◕,依次加入標本✘│、標準品✘│、HRP標記的檢測抗體✘↟↟✘◕,經過溫育並徹底洗滌·↟。用底物TMB顯色✘↟↟✘◕,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色✘↟↟✘◕,並在酸的作用下轉化成最終的黃色·↟。顏色的深淺和樣品中的鵝免疫球蛋白M(IgM)呈正相關·↟。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)✘↟↟✘◕,計算樣品濃度·↟。
 
  豬ELISA試劑盒的樣本處理及要求◕·✘:
  1✘│、血清◕·✘:將收集於血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜✘↟↟✘◕,然後1000×g離心20分鐘✘↟↟✘◕,取上清即可✘↟↟✘◕,或將上清置於-20℃或-80℃儲存✘↟↟✘◕,但應避免反覆凍融·↟。
  2✘│、血漿◕·✘:用EDTA或肝素作為抗凝劑採集標本✘↟↟✘◕,並將標本在採集後的30分鐘內於2-8℃ 1000×g離心15分鐘✘↟↟✘◕,取上清即可檢測✘↟↟✘◕,或將上清置於-20℃或-80℃儲存✘↟↟✘◕,但應避免反覆凍融·↟。
  3✘│、組織勻漿◕·✘:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織✘↟↟✘◕,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果)✘↟↟✘◕,稱重後將組織剪碎·↟。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比✘↟↟✘◕,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS✘↟↟✘◕,具體體積可根據實驗需要適當調整✘↟↟✘◕,並做好記錄·↟。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中✘↟↟✘◕,於冰上充分研磨·↟。為了進一步裂解組織細胞✘↟↟✘◕,可以對勻漿液進行超聲破碎✘↟↟✘◕,或反覆凍融·↟。最後將勻漿液於5000×g離心5~10分鐘✘↟↟✘◕,取上清檢測·↟。
  4✘│、細胞培養物上清或其它生物標本◕·✘:請1000×g離心20分鐘✘↟↟✘◕,取上清即可檢測✘↟↟✘◕,或將上清置於-20℃或-80℃儲存✘↟↟✘◕,但應避免反覆凍融·↟。
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